国产AV人人夜夜澡人人爽麻豆 ,精品国产一区二区三区av 性色,米奇777四色精品人人爽,学生呦侵视频在线观看

您的位置: 首頁 > 技術(shù)文章 > 溫和且靈活地自動化培養(yǎng)哺乳動物貼壁細(xì)胞

溫和且靈活地自動化培養(yǎng)哺乳動物貼壁細(xì)胞

更新時(shí)間:2024-12-23瀏覽:489次

實(shí)現(xiàn)本應(yīng)用自動化的三大理由

哺乳動物體外細(xì)胞培養(yǎng)物的可用性是藥物發(fā)現(xiàn)的一個(gè)關(guān)鍵瓶頸。為了將哺乳動物細(xì)胞作為基于細(xì)胞的高通量測試的資源,必須克服人工細(xì)胞繁殖缺乏標(biāo)準(zhǔn)化、重復(fù)性差和通量不足的問題。

• 提供大量培養(yǎng)細(xì)胞。

• 確保可重復(fù)性和過程安全性。

• 標(biāo)準(zhǔn)化哺乳動物細(xì)胞增殖。

 

簡介

在藥物篩選和細(xì)胞生物學(xué)研究中對哺乳動物細(xì)胞的需求不斷增加。在高通量篩選中,候選藥物的評估基于其對細(xì)胞培養(yǎng)的生物效應(yīng),在基于細(xì)胞的ADME-T測定中測試新化合物的代謝行為和毒性?;A(chǔ)研究依賴于大量的細(xì)胞系和原代細(xì)胞,它們構(gòu)成了闡明細(xì)胞增殖、分化和功能的基本機(jī)制的工具。在這個(gè)領(lǐng)域,胚胎干細(xì)胞作為一個(gè)模型系統(tǒng)越來越重要。這些細(xì)胞除了具有巨大的分化潛能外,還具有無限自我更新的能力,這有助于它們進(jìn)行有效的基因修飾。目前使用的細(xì)胞培養(yǎng)方法的局限性包括缺乏標(biāo)準(zhǔn)化與重復(fù)性差和通量不足。由此可見,細(xì)胞的可用性會成為實(shí)驗(yàn)全流程的瓶頸。HAMILTON和Life&Brain結(jié)合了他們在原代細(xì)胞、細(xì)胞系和胚胎干細(xì)胞自動培養(yǎng)系統(tǒng)開發(fā)方面的專業(yè)知識,該系統(tǒng)可大量提供高質(zhì)量的細(xì)胞。

方法描述

該系統(tǒng)的典型流程包括:

• 預(yù)定運(yùn)行期間細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)基的更換

• 胰蛋白酶化后細(xì)胞培養(yǎng)物的收集

• 在培養(yǎng)孔內(nèi)均勻地接種細(xì)胞

• 向細(xì)胞培養(yǎng)物中添加生長因子或藥理活性物質(zhì)

通常培養(yǎng)基更換在隔夜運(yùn)行中進(jìn)行,如下所示:

• 通過工作列表選擇感興趣的微孔板

• 計(jì)算容器中的適量培養(yǎng)基,并從冷培養(yǎng)箱中獲??;然后將培養(yǎng)基容器轉(zhuǎn)移至加熱位置

• 將第一個(gè)板從溫培養(yǎng)箱轉(zhuǎn)移到移液工作站,并去除殘留的培養(yǎng)基

• 使用一次性吸頭或可洗鋼針更換培養(yǎng)基

• 將微孔板轉(zhuǎn)移回培養(yǎng)箱中

溫和且靈活地<a class=

手動溫和處理 - 轉(zhuǎn)移至自動化流程

Hamilton的液體處理技術(shù)可以模擬典型的手動操作,例如板混勻或溫和移液。本品非常適合處理脆弱的哺乳動物貼壁細(xì)胞,如胚胎干細(xì)胞。

技術(shù)

Hamilton“無管” 技術(shù): Hamilton 監(jiān)測空氣置換(MAD)移液技術(shù)消除了管、泵或系統(tǒng)液體的使用,從而顯著降低了細(xì)菌生長造成污染的風(fēng)險(xiǎn)。

接種

這采用Cellhost系統(tǒng)接種可使小鼠胚胎干細(xì)胞均勻分布在飼養(yǎng)細(xì)胞層上。在胚胎干細(xì)胞的情況下,細(xì)胞的均勻分布尤為重要,因?yàn)榧?xì)胞團(tuán)塊的形成導(dǎo)致不受控制的分化。為了達(dá)到這一結(jié)果,用機(jī)械手模擬在微孔板上分配細(xì)胞的典型手動動作。套系統(tǒng)主要由8通道的Microlab   STARlet液體處理工作站構(gòu)成,手動裝載吸頭、試劑、濾膜板和PCR板的載架,真空抽濾系統(tǒng)整合在工作站的臺面上。在操作過程中,通過CO-RE抓手來移動微孔板、裝載及拆卸抽濾板架。

培養(yǎng)基更換

細(xì)胞培養(yǎng)中最常見的流程是培養(yǎng)基的更換。為了最大限度地減少殘留量,在一側(cè)升高細(xì)胞培養(yǎng)板(圖2),并在孔的底端小心吸出培養(yǎng)基。在孔邊緣緩慢加入新培養(yǎng)基,從而避免干擾細(xì)胞層。顯微鏡研究顯示細(xì)胞層的完整性(圖3a)-與不太謹(jǐn)慎的手動實(shí)驗(yàn)形成鮮明對比(圖3b)。

溫和且靈活地<a class=

 

溫和且靈活地<a class=

 

系統(tǒng)描述

Cellhost系統(tǒng)的核心是配備內(nèi)部機(jī)械手iSWAP的Microlab STAR移液工作站。其在平臺上處理SBS標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)板。兩個(gè)Kendro培養(yǎng)箱整合到系統(tǒng)中(圖1)。系統(tǒng)的模塊化架構(gòu)允許將附加組件整合到臺面上,例如成像系統(tǒng)。

應(yīng)用軟件

該系統(tǒng)由標(biāo)準(zhǔn)PC和Hamilton開放靈活的Microlab Venus軟件控制,用于過程控制和第三方組件整合。任何設(shè)計(jì)用于處理大量板的自動化系統(tǒng),每個(gè)板都經(jīng)歷復(fù)雜的操作且需具備數(shù)據(jù)跟蹤能力。Hamilton Celltask軟件可輕松安排重復(fù)過程,使細(xì)胞培養(yǎng)自動化操作非常簡便(圖4)。Celltrack軟件監(jiān)測并跟蹤每個(gè)板上的每個(gè)操作,并根據(jù)CFR 21第11部分的要求進(jìn)行數(shù)據(jù)文件記錄。

溫和且靈活地<a class=

系統(tǒng)的生物驗(yàn)證

根據(jù)GLP,使用胚胎干細(xì)胞(最敏感的細(xì)胞培養(yǎng)范例之一)驗(yàn)證了Cellhost系統(tǒng)。已經(jīng)明確驗(yàn)證了生物可行性:

•  移液(接種、收集)后細(xì)胞的活力

•  更換培養(yǎng)基后細(xì)胞層完整

•  接種后細(xì)胞在孔中的均勻分布

•  使用可清洗鋼針時(shí)無交叉污染

結(jié)果

用Cellhost培養(yǎng)的胚胎干細(xì)胞在接種和更換培養(yǎng)基后保留其典型形態(tài)(圖5)。自發(fā)分化的程度不超過在人工處理的培養(yǎng)物中觀察到的程度。通過堿性磷酸酶活性的組織化學(xué)檢測來驗(yàn)證多能狀態(tài)的維持。培養(yǎng)48小時(shí)后的細(xì)胞活力與手動對照實(shí)驗(yàn)中測定的相當(dāng)。未檢出污染。

溫和且靈活地<a class=

通量和容量

6孔板2ml培養(yǎng)基的處理時(shí)間:

•  培養(yǎng)基更換:340s

•  細(xì)胞收集:1500s

•  滋養(yǎng)細(xì)胞制備:520s

•  胚胎干細(xì)胞(ESC)板的制備:940s

•  細(xì)胞培養(yǎng)箱可擴(kuò)展至容納1000個(gè)96孔板

討論

這項(xiàng)研究的結(jié)果表明了胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)自動化的可行性。此處使用的系統(tǒng)優(yōu)點(diǎn)是基于手動方法并且不需要液體補(bǔ)充模塊。細(xì)胞在各種移液步驟中容易存活,如機(jī)械接種和反復(fù)更換培養(yǎng)基。顯微鏡觀察顯示,胚胎干細(xì)胞的典型形態(tài)得以保留。此外,與手動對照相比,未觀察到自發(fā)分化增加-這明確表明Cellhost溫和處理細(xì)胞。該系統(tǒng)以無污染的方式運(yùn)行??梢灶A(yù)期,為胚胎干細(xì)胞精細(xì)培養(yǎng)而開發(fā)的過程可以轉(zhuǎn)化為毒理學(xué)試驗(yàn)和藥物篩選中常用的不太敏感的細(xì)胞類型。為進(jìn)一步自動化細(xì)胞系(如CaCo2)和下游應(yīng)用(如報(bào)告基因分析)掃清了道路。隨著細(xì)胞培養(yǎng)的自動化,制藥和生物技術(shù)公司的人工工作量大大減少。

 

 

 

Contact Us
  • QQ:3846578731
  • 郵箱:JiLi@hamilton.ch
  • 傳真:021-61646567
  • 地址:上海市浦東新區(qū)盛夏路666號E樓101室

掃一掃  微信咨詢

©2025 哈美頓(上海)實(shí)驗(yàn)器材有限公司 版權(quán)所有    備案號:滬ICP備2021011148號-5    技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)    Sitemap.xml    總訪問量:8520    管理登陸

国产精品久久香蕉免费播放| 成全动漫视频在线观看| 国产精品亚洲精品日韩已方| 欧美丰满熟妇BBBBBB百度| 嫂子的职业在线观看| a级毛片在线观看| 一本色道久久88加勒比—综合| 小箩莉末发育娇小性色xxxx| 亚洲丰满熟女一区二区哦| 欧洲国产伦久久久久久久| 久久中文字幕人妻熟av女蜜柚m| 国产jizzjizz全部免费看| 久久人妻av无码中文专区| 国产三级做爰在线播放| 亚洲精品熟女国产| 蜜臀久久久久久999草草| 凹凸国产熟女精品视频国语 | 无码 人妻 在线 视频| 久久ER热在这里只有精品66| av免费在线观看| 久久9精品区-无套内射无码| 国产激情无码一区二区三区| 国产日韩AV免费无码一区二区 | 香蕉久久夜色精品国产| 国产麻豆精品一区二区三区| 亚洲 欧美 另类 动漫 在线| 小粉嫩精品a片在线视看| 国产真实露脸乱子伦| 欧美精品精品一区在线发布| 色欲人妻综合aaaaaaaa网| 诱人的奶头bd在线观看| 初尝人妻少妇中文字幕| 高傲人妻女教师的沉沦长篇| 精品一区二区三区在线视频| 亚洲乱码国产乱码精品精大量| 欧美老熟妇乱子伦视频| 末发育女av片一区二区在线观看| 小三的下面又紧水又多| 天堂8在线新版官网| 99热这里有精品| 精品人妻系列无码人妻在线不卡|